Técnica do DNA complementar - cDNA

O DNA é obtido a partir de uma molécula de mRNA.

Esta técnica é utilizada para quando se pretende clonar genes sem os seus intrões, pois o cDNA é produzido a partir de uma molécula de mRNA maturado (que já sofreu processamento e que por isso não possui intrões).

o cDNA utiliza-se também em conjunto com a técnica do rDNA.

A enzima transcriptase reversa usa a molécula de mRNA maduro como molde para fazer uma cadeia de DNA.

Após a formação da cadeia de DNA, a enzima DNA polimerase actua, formando, por complementaridade, a outra cadeia de DNA a partir dos nucleótidos presentes no meio, constituindo-se uma molécula estável (entretanto o mRNA degradou-se por ser instável). 

De seguida insere-se no vector.

Importância do cDNA:

As bactérias utilizadas, por exemplo, na técnica do DNA recombinante, por serem seres procariontes, não têm mecanismos de maturação do DNA e, desta forma, quando se incorporam genes com intrões nestes seres, eles executam a sua transcrição ininterruptamente, incluindo os intrões, gerando uma proteína diferente da desejada. Assim, é inserido um clone de cDNA, de modo a garantir a produção correcta da proteína.

Para além disto, a comparação entre a molécula de cDNA, que não possui intrões, com a molécula de DNA original permite localizar os exões, ou seja, as regiões que verdadeiramente contribuem para a produção da proteína, e os intrões, ou seja, as regiões não codificantes de um determinado gene.

É importante referir ainda que a descoberta da transcriptase reversa e do seu mecanismo de acção e, consequentemente, da tecnologia do cDNA, abriu um importante caminho na biologia molecular. A molécula de RNA é extremamente instável e, dependendo do RNA em questão, o número de cópias pode estar muito limitado. Desta forma, a possibilidade de se trabalhar com cDNA ao invés de RNA tem facilitado muito o trabalho dos cientistas, já que o cDNA é uma molécula estável, de fácil manuseamento e a sua multiplicação é bastante simples.