Técnica do DNA recombinante - rDNA

Objectivo: produzir moléculas de DNA a partir da combinação de genes com diferentes proveniências.

Para produzir DNA recombinante:

1 – as enzimas de restrição cortam o DNA em fragmentos manipuláveis que contêm o gene pretendido;

2 – esses fragmentos obtidos são incorporados num vector* (transporte do fragmento de DNA para uma célula);

3 – para que o fragmento de DNA seja incorporado no vector é necessário que a mesma enzima de restrição, que tinha actuado no DNA, actue agora no vector – assim, as zonas cortadas conseguem-se complementar;

4 – as enzimas DNA ligases são as responsáveis pela ligação dos dois fragmentos de DNA – é produzida uma nova molécula estável;

5 – o vector recombinante é colocado junto às bactérias (célula hospedeira) para ser incorporado por elas, que em condições adequadas se dividem criando inúmeras cópias do gene aí inserido – clonagem;

6 – seleccionar as bactérias que incorporaram o vector;

7 – purificação – separar o composto de interesse dos outros que foram produzidos pelo metabolismo normal do hospedeiro

* vector: plasmídeos (pequenos fragmentos livres de DNA com forma circular que estão presentes em bactérias) ou bacteriófagos (virus que atacam bactérias)

Com o rDNA é possível introduzir um gene humano em bactérias para que estas produzam, em larga escala, uma determina proteína humana.

Aplicações da tecnologia de rDNA